Mikä on paras menetelmä?
– Testit SARS-CoV-2-infektion diagnosoimiseksi
Vahvistetuissa COVID-19-tapauksissa raportoitujen yleisiä kliinisiä oireita ovat kuume, yskä, myalgia tai väsymys.Nämä oireet eivät kuitenkaan ole COVID-19:n ainutlaatuisia piirteitä, koska nämä oireet ovat samankaltaisia kuin muiden viruksen tartuttamien sairauksien, kuten influenssan, oireet.Tällä hetkellä virusnukleiinihappojen reaaliaikainen PCR (rt-PCR), CT-kuvaus ja jotkin hematologiset parametrit ovat ensisijaisia välineitä infektion kliinisen diagnoosin suorittamisessa.Kiinan CDC on kehittänyt ja käyttänyt monia laboratoriotestipakkauksia potilasnäytteiden testaamiseen COVID-19:n varalta.1, Yhdysvaltain CDC2ja muut yksityiset yritykset.IgG/IgM-vasta-ainetesti, serologinen testimenetelmä, on lisätty diagnostisiksi kriteereiksi myös Kiinan päivitetyssä versiossa uuden koronavirustaudin (COVID-19) diagnoosi- ja hoitoohjeista, joka julkaistiin 3.3.1.Virusnukleiinihappo-rt-PCR-testi on edelleen nykyinen standardi diagnostinen menetelmä COVID-19-diagnoosissa.
StrongStep®Uusi Coronavlrus (SARS-COV-2) Multiplex Real-Time PCR Kit (ilmaisu kolmelle geenille)
Silti nämä reaaliaikaiset PCR-testisarjat, jotka etsivät viruksen geneettistä materiaalia, esimerkiksi nenä-, oraali- tai peräaukon vanupuikoista, kärsivät monista rajoituksista:
1) Näillä testeillä on pitkät läpimenoajat ja ne ovat monimutkaisia käytössä;yleensä kestää keskimäärin 2–3 tuntia tulosten luomiseen.
2) PCR-testit vaativat sertifioituja laboratorioita, kalliita laitteita ja koulutettuja teknikoita.
3) COVID-19:n rt-PCR:ssä on joitakin vääriä negatiivisia tuloksia.Se voi johtua ylempien hengitysteiden vanupuikkonäytteen alhaisesta SARS-CoV-2-viruskuormasta (uusi koronavirus tartuttaa pääasiassa alempia hengitysteitä, kuten keuhkoalveoleja), eikä testistä voida tunnistaa ihmisiä, jotka ovat käyneet läpi infektion, toipuneet ja poistivat viruksen kehostaan.
Lirong Zoun et ai4havaitsivat, että korkeammat viruskuormat havaittiin pian oireiden alkamisen jälkeen, jolloin nenästä havaittiin korkeampi viruskuormitus kuin kurkussa, ja SARS-CoV-2-tartunnan saaneiden potilaiden viruksen nukleiinihappojen leviämismalli muistuttaa influenssapotilaiden.4ja näyttää erilaiselta kuin SARS-CoV-2-tartunnan saaneilla potilailla.
Yang Pan et ai5tutki sarjanäytteitä (kurkkupuikkonäytteitä, ysköstä, virtsaa ja ulostetta) kahdelta Pekingissä sijaitsevalta potilaalta ja havaitsi, että viruskuormitus kurkkupuikkonäytteissä ja yskösnäytteissä saavutti huippunsa noin 5–6 päivää oireiden alkamisen jälkeen, yskösnäytteet osoittivat yleensä korkeampia viruskuormia kuin kurkun vanupuikkonäytteitä.Virus-RNA:ta ei havaittu näiden kahden potilaan virtsa- tai ulostenäytteistä.
PCR-testi antaa positiivisen tuloksen vain, kun virus on edelleen läsnä.Testit eivät pysty tunnistamaan ihmisiä, jotka ovat kokeneet infektion, toipuneet ja poistaneet viruksen kehostaan.Itse asiassa vain noin 30–50 % oli PCR-positiivinen potilailla, joilla oli kliinisesti diagnosoitu uusi koronaviruskeuhkokuume.Monia uusia koronaviruskeuhkokuumepotilaita ei voida diagnosoida negatiivisen nukleiinihappotestin vuoksi, joten he eivät voi saada vastaavaa hoitoa ajoissa.Ohjeiden ensimmäisestä kuudenteen painokseen tukeutuen yksinomaan nukleiinihappotestien tulosten diagnoosiin, mikä aiheutti suuria ongelmia kliinikoille. Varhaisin "viljelijä", tohtori Li Wenliang, silmälääkäri Wuhan Centralista Sairaala on kuollut.Hänelle tehtiin elämänsä aikana kolme nukleiinihappotestiä kuumeen ja yskän varalta, ja viimeksi hän sai PCR-positiiviset tulokset.
Asiantuntijoiden keskustelun jälkeen päätettiin lisätä seerumin testausmenetelmiä uutena diagnostisena kriteerinä.Vasta-ainetestit, joita kutsutaan myös serologisiksi testeiksi, voivat vahvistaa, onko joku saanut tartunnan, vaikka hänen immuunijärjestelmänsä on poistanut COVID-19:n aiheuttavan viruksen.
StrongStep® SARS-COV-2 IgG/IgM-vasta-aineiden pikatesti
IgG/IgM-vasta-ainetesti auttaa jäljittämään paljon väestöpohjaisemmin tartunnan saaneita, koska monet tapaukset näyttävät leviävän oireettomilta potilailta, joita ei voida helposti tunnistaa.Pariskunta Singaporessa, aviomies oli PCR-testissä positiivinen, hänen vaimonsa PCR-tulos oli negatiivinen, mutta vasta-ainetestitulokset osoittivat, että hänellä oli vasta-aineita, kuten myös hänen miehellään.
Serologiset määritykset on validoitava huolellisesti sen varmistamiseksi, että ne reagoivat luotettavasti, mutta vain uuden viruksen vasta-aineisiin.Yksi huolenaihe oli se, että vakavaa akuuttia hengitystieoireyhtymää aiheuttavien virusten ja COVID-19:n samankaltaisuus voi johtaa ristireaktiivisuuteen.Xue Feng wangin kehittämä IgG-IgM6katsottiin voivan käyttää point-of-care -testinä (POCT), koska se voidaan tehdä lähellä vuodetta sormenpääverellä.Kitin herkkyys on 88,66 % ja spesifisyys 90,63 %.Vääriä positiivisia ja vääriä negatiivisia tuloksia oli kuitenkin edelleen.
Kiinan päivitetyssä versiossa uuden koronavirustaudin (COVID-19) diagnoosi- ja hoitoohjeista1, vahvistetut tapaukset määritellään epäillyiksi tapauksiksi, jotka täyttävät jonkin seuraavista kriteereistä:
(1) Hengitystienäytteet, veri- tai ulostenäytteet, jotka on testattu positiivisiksi SARS-CoV-2-nukleiinihapon suhteen rt-PCR:llä;
(2) Viruksen geneettinen sekvensointi hengitystie-, veri- tai ulostenäytteistä on erittäin homologinen tunnetun SARS-CoV-2:n kanssa.
(3) Seerumin uudet koronavirukselle spesifiset IgM-vasta-aineet ja IgG-vasta-aineet olivat positiivisia;
(4) Seerumin uusi koronavirusspesifinen IgG-vasta-aine, joka muuttui negatiivisesta positiiviseksi tai koronavirusspesifinen IgG-vasta-aine toipumisjakson aikana, on 4 kertaa suurempi kuin akuutin jakson aikana.
COVID-19:n diagnoosi ja hoito
| Ohjeita | Julkaistu | Vahvistetut diagnostiset kriteerit |
| Versio 7 | 3 maaliskuuta 2020 | ❶ PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| Versio 6 | 18. helmikuuta 2020 | ❶ PCR ❷ NGS |
Viite
1. Ohjeet uuden koronaviruksen aiheuttaman keuhkokuumeen diagnosointiin ja hoitoon (koeversio 7, Kiinan kansantasavallan kansallinen terveyskomissio, julkaistu 3.3.2020)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Käytä tutkimuksessa vain reaaliaikaista RT-PCR-protokollaa 2019-nCoV:n tunnistamiseen
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Singapore väittää käyttäneensä ensimmäistä kertaa vasta-ainetestiä koronavirusinfektioiden seuraamiseen
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4. SARS-CoV-2-viruskuormitus tartunnan saaneiden potilaiden ylähengitysnäytteissä 19.2.2020 DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. SARS-CoV-2:n viruskuormat kliinisissä näytteissä Lancet Infect Dis 2020 Julkaistu verkossa 24. helmikuuta 2020 (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. SARS-CoV-2:n nopean IgM-IgG-yhdistelmävasta-ainetestin kehittäminen ja kliininen käyttö
Infektiodiagnoosi XueFeng Wang ORCID ID: 0000-0001-8854-275X
Postitusaika: 17.3.2020
